前段時間有家做過濾器材的公司（后文簡稱A公司）找到我們，說是可以給我們提供核酸純化柱。雖然Simgen的核酸純化柱都是自產的，但是出于好奇，我們還是要了一些試用裝，測試它的核酸吸附效率以及穩定性。現在我們把測試方法分享給大家，作為核酸純化柱選擇的一個依據。

（一）實驗目的

對比測試Simgen核酸純化柱和A公司核酸純化柱的性能。

（二）實驗材料與設備：

1. 新鮮培養的質粒菌

2. 快速質粒DNA小量試劑盒（Simgen Cat.No.1005050）、A公司提供的質粒DNA純化柱

3. 臺式離心機（eppendorf Centrifuge 5415 D）

4. 旋渦振蕩器（越新儀器，XH BH-C）

5. 超微量分光光度計（Simgen Cat.No.Sim-100）

6. 電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型 ）

7. 電熱恒溫培養箱（上海精宏實驗設備有限公司，DNP-9082）

（三）實驗內容：

1. 12000 rpm離心30秒收集5管3 ml過夜培養的細菌，棄盡培養基。加入250 μl已加入RNase A 的Buffer I，充分懸浮沉淀的細菌。

2. 加入250 μl Buffer II，溫和并充分地翻轉離心管4-6次。

3. 加入350 μl Buffer N8，溫和并充分地翻轉離心管直至溶液中殘留的藍色沉淀全部消失，轉變為淡黃色沉淀。

4. 13200 rpm離心2分鐘。

5. 將所有上清液倒入50 ml離心管中，混合均勻，各取2個Simgen公司和A公司的核酸純化柱置于2 ml離心管中，吸取800 μl混勻的上清液加入到各個核酸純化柱中，蓋上管蓋，12000 rpm離心30秒。

6. 棄2 ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml離心管中，在核酸純化柱中加入800 μl Buffer W2，蓋上管蓋，12000 rpm離心30秒。

7. 棄2 ml離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml離心管中，最高速13200 rpm離心1分鐘。

8. 棄2 ml離心管，將核酸純化柱置于一個潔凈的1.5 ml離心管中，在純化柱的膜中央加入60 μl Buffer E，蓋上管蓋，室溫靜置1分鐘，12000 rpm離心30秒。

9. 在超微量分光光度計上測量洗脫的質粒DNA的濃度并進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

10. 各取10個Simgen公司和A公司的核酸純化柱，在50℃恒溫箱中放置7天，7天后各取出2個核酸純化柱，再加上2個Simgen公司同一批的未放入恒溫箱的純化柱，按步驟1-9再測試一遍。

（四）實驗結果：

1. 在超微量分光光度計上用Buffer E調零，測量洗脫的質粒DNA，結果如下：

樣本編號0為常溫放置7天的Simgen核酸純化柱，樣本編號1為50℃放置7天的Simgen核酸純化柱，樣本編號2為50℃放置7天的A公司核酸純化柱。 

2. 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl提取到的質粒DNA，電泳20分鐘，結果如下：

（五）實驗討論與分析：

1. 結合表1和圖1分析可知，未經恒溫箱放置前，兩公司的核酸純化柱對質粒DNA的吸附效率無明顯差異。

2. 結合表2和圖2分析可知，Simgen核酸純化柱在50℃放置7天后核酸吸附效果未受影響，與室溫放置的對照組吸附效率無明顯差異，而A公司的核酸純化柱在50℃放置7天后核酸吸附效果明顯變差，吸附效率只有原來的30%。

3. 作為柱式核酸純化試劑盒中的核酸純化柱，其重要性往往被忽略，甚至是國際巨頭Qiagen公司也栽過跟頭，曾經要求用戶將柱子放到2~8℃儲存，以免影響其回收效率。所以測試純化柱穩定性的方法也很簡單，只要將純化柱在高于常溫的條件下放置一段時間，就能辨別出柱子的穩定性差異。國內的T**ngen、O**ga等廠家的一些試劑盒要求用戶在使用前用平衡液洗滌純化柱，其本質就是純化柱穩定性有缺陷所導致的。所以用戶在大量選購純化柱時務必要做一下純化柱的穩定性測試，如果不巧是選用了來源不明的核酸純化柱（特別是沒有核酸純化技術累積的公司），為了保險起見，最好是放到2~8℃儲存。